ساب کلونینگ ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز موش سوری در وکتور لنتی ویرال و انتقال آن به رده سلولی hek

سابقه و هدف: ژن درمانی یکی از مهم­ترین شیوه های تحقیقات بالینی است که ارایه دهنده­ی روش های جدیدی برای درمان نقص های ژنتیکی می باشد. نقص ژنتیکی آنزیم گلوکوسربروزیداز ( gba ) عامل بیماری گوشه بیش از بقیه ی بیماری ها در ژن درمانی مورد توجه قرار گرفته است. هدف از انجام این پروژه کلونینگ و انتقال ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز توسط لنتی ویرال وکتور ارتقایافته به رده ی سلول های hek می باشد. مواد و روش ها: مطالعه به روش تجربی و به منظور تولید و تکثیر cdna ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز به کمک پرایمرهای اختصاصی به روش pcr انجام گرفت و در وکتور غیر بیان کننده، کلون و ترادف یابی گردید. سپس ژن نوترکیب را در لنتی ویرال وکتور ارتقایافته دارای ژن گزارش گر gfp ساب کلون شد. پس از کشت سلول های hek وکتور نوترکیب لنتی ویرال به آنها منتقل شد و انتقال ژن gba با استفاده از ژن گزارش گر gfp بررسی گردید. نتایج: تکثیر و کلونینگ ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز با استفاده از آنزیم های محدودگر تایید گردید. ترادف های ژن gba با ترادف های گزارش شده­ی آن کاملا تطبیق داشت. ساب کلونینگ ژن gba در وکتور لنتی ویرال با استفاده از آنزیم های محدودکننده ی مختلف تایید شد. انتقال ژن نوترکیب gba توسط بیان ژن گزارش گر با استفاده از پروتئین های فلورسنتی تایید گردید. نتیجه گیری: در این تحقیق بخشی از فرآیند پروتکل ژن درمانی با انتقال ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز موش به سلول های hek توسط وکتور لنتی ویرال انجام گرفت.